CARACTERIZAÇÃO ENZIMÁTICA DA AMILASE

Resumo

Este trabalho teve como objetivo realizar a caracterização enzimática da αamilase derivada do pâncreas de camundongos, por análises de dosagem enzimática visando caracterizar as melhores condições para a reação enzimática in vitro. Foi realizado ensaio para a construção de uma Curva Padrão de Glicose usando cinco diluições de solução de glicose à 1%. Para se dosar a atividade enzimática, mediu-se a formação de seu produto (glicose), através da incorporação de um agente redutor (DNS). Foram testados quatro tempos diferentes, 5, 10, 15 e 20 minutos, sete condições de pH diferentes (de 2,2 até 8,0), em temperaturas de 22, 30, 40, 50 e 60°C, com cinco diluições diferentes com 100μg, 200μg, 400μg, 600μg, 800μg e 1000μg. Para obter a Curva Padrão, plotou-se os dados obtidos na ferramenta Excel gerando um gráfico de dispersão com os valores de molaridade calculados (eixo X) em função das absorbâncias obtidas (eixo Y). Na análise do efeito do tempo de incubação da reação, houve maior liberação de AR (concentração: 0,884 μg/mL) no tempo 30min. Analisando o efeito do pH na atividade enzimática, com tempo de incubação de 15 minutos, a maior liberação de AR se deu em pH 6.0, com valor de 0,494 μg/mL. A maior liberação de AR ocorreu na temperatura de 40°C (concentração: 0,563 μg/mL). O Vmax obtido no ensaio corresponde à 1,088 μmoles de glicose/min (com [] de 1000 μg/μL). Conclui-se para tanto que, a enzima α-amilase possui características de temperatura e pH semelhantes a análogas extraídas de locais e espécies distintas.